Hvala, ker ste obiskali Nature.com. Različica brskalnika, ki jo uporabljate, ima omejeno podporo za CSS. Za najboljše rezultate priporočamo uporabo novejšega brskalnika (ali onemogočanje načina združljivosti v Internet Explorerju). Medtem bomo za zagotovitev nadaljnje podpore spletno mesto prikazali brez slogov in JavaScripta.
Vzpostavitev živalskih modelov modičnih sprememb (MC) je pomembna osnova za preučevanje MC. Štiriinpetdeset novozelandskih belih kuncev je bilo razdeljenih v skupino s placebom, skupino z implantacijo mišice (ME skupina) in skupino z implantacijo nucleus pulposus (NPE skupina). V skupini NPE je bila medvretenčna ploščica izpostavljena z anterolateralnim ledvenim kirurškim pristopom, za prebadanje telesa vretenca L5 v bližini končne plošče pa je bila uporabljena igla. NP je bila z brizgo odstranjena iz medvretenčne ploščice L1/2 in vanjo injicirana. Vrtanje luknje v subhondralni kosti. Kirurški postopki in metode vrtanja v skupini z implantacijo mišice in skupini s placebom so bili enaki kot v skupini z implantacijo NP. V skupini ME je bil v luknjo vstavljen kos mišice, medtem ko v skupini s placebom v luknjo ni bilo vstavljeno nič. Po operaciji so bili opravljeni MRI skeniranje in molekularno biološko testiranje. Signal v skupini NPE se je spremenil, vendar v skupini s placebom in ME ni bilo očitne spremembe signala. Histološko opazovanje je pokazalo, da so na mestu implantacije opazili nenormalno proliferacijo tkiva, v skupini NPE pa so povečali izražanje IL-4, IL-17 in IFN-γ. Vsaditev NP v subhondralno kost lahko tvori živalski model MC.
Modicne spremembe (MC) so lezije končnih plošč vretenc in sosednjega kostnega mozga, vidne na slikanju z magnetno resonanco (MRI). So precej pogoste pri posameznikih s pridruženimi simptomi1. Številne študije so poudarile pomen MC zaradi njene povezave z bolečinami v spodnjem delu hrbta (LBP)2,3. de Roos in sod.4 ter Modic in sod.5 so neodvisno prvi opisali tri različne vrste subhondralnih signalnih nepravilnosti v kostnem mozgu vretenc. Modicne spremembe tipa I so hipointenzivne na T1-uteženih (T1W) zaporedjih in hiperintenzivne na T2-uteženih (T2W) zaporedjih. Ta lezija razkriva fisurne končne plošče in sosednje vaskularno granulacijsko tkivo v kostnem mozgu. Modicne spremembe tipa II kažejo visok signal na T1W in T2W zaporedjih. Pri tej vrsti lezije je mogoče najti uničenje končnih plošč, pa tudi histološko maščobno nadomestitev sosednjega kostnega mozga. Modicne spremembe tipa III kažejo nizek signal v T1W in T2W zaporedjih. Opazili so sklerotične lezije, ki ustrezajo končnim ploščam6. MC velja za patološko bolezen hrbtenice in je tesno povezana s številnimi degenerativnimi boleznimi hrbtenice7,8,9.
Glede na razpoložljive podatke je več študij ponudilo podroben vpogled v etiologijo in patološke mehanizme MC. Albert in sodelavci so predlagali, da bi MC lahko povzročila hernija diska8. Hu in sodelavci so MC pripisali hudi degeneraciji diska10. Kroc je predlagal koncept "notranje rupture diska", ki pravi, da lahko ponavljajoče se poškodbe diska povzročijo mikroraztrganine v končni plošči. Po nastanku razpoke lahko uničenje končne plošče s strani nucleus pulposus (NP) sproži avtoimunski odziv, kar nadalje vodi do razvoja MC11. Ma in sodelavci so delili podobno stališče in poročali, da avtoimunost, ki jo povzroča NP, igra ključno vlogo pri patogenezi MC12.
Celice imunskega sistema, zlasti limfociti CD4+ T pomagalci, igrajo ključno vlogo pri patogenezi avtoimunosti13. Nedavno odkrita podskupina Th17 proizvaja provnetni citokin IL-17, spodbuja izražanje kemokinov in stimulira celice T v poškodovanih organih k proizvodnji IFN-γ14. Tudi celice Th2 imajo edinstveno vlogo pri patogenezi imunskih odzivov. Izražanje IL-4 kot reprezentativne celice Th2 lahko povzroči hude imunopatološke posledice15.
Čeprav je bilo izvedenih veliko kliničnih študij o MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, še vedno primanjkuje ustreznih živalskih eksperimentalnih modelov, ki bi lahko posnemali proces MC, ki se pogosto pojavlja pri ljudeh, in bi jih lahko uporabili za raziskovanje etiologije ali novih zdravljenj, kot je ciljno usmerjena terapija. Do danes je bilo poročanih le o nekaj živalskih modelih MC, ki bi preučevali osnovne patološke mehanizme.
Na podlagi avtoimunske teorije, ki sta jo predlagala Albert in Ma, je ta študija vzpostavila preprost in ponovljiv model kunčjega karcinoma mieloične kisline (MC) z avtotransplantacijo NP v bližini izvrtane končne plošče vretenca. Drugi cilji so opazovanje histoloških značilnosti živalskih modelov in ocena specifičnih mehanizmov NP pri razvoju MC. V ta namen uporabljamo tehnike, kot so molekularna biologija, MRI in histološke študije, za preučevanje napredovanja MC.
Dva kunca sta poginila zaradi krvavitve med operacijo, štirje pa so poginili med anestezijo med slikanjem z magnetno resonanco. Preostalih 48 kuncev je preživelo in po operaciji ni kazalo vedenjskih ali nevroloških znakov.
MRI kaže, da je intenzivnost signala vgrajenega tkiva v različnih luknjah različna. Intenzivnost signala telesa vretenca L5 v skupini NPE se je postopoma spreminjala 12, 16 in 20 tednov po vstavitvi (zaporedje T1W je pokazalo nizek signal, zaporedje T2W pa mešan signal in nizek signal) (slika 1C), medtem ko je videz MRI drugih dveh skupin vgrajenih delov v istem obdobju ostal relativno stabilen (slika 1A, B).
(A) Reprezentativni zaporedni MRI posnetki ledvene hrbtenice zajcev v 3 časovnih točkah. Na slikah skupine s placebom niso bile ugotovljene nobene nepravilnosti signala. (B) Značilnosti signala telesa vretenca v skupini ME so podobne tistim v skupini s placebom in na mestu vstavitve sčasoma ni opaziti pomembne spremembe signala. (C) V skupini NPE je nizek signal jasno viden v zaporedju T1W, mešani signal in nizek signal pa sta jasno vidna v zaporedju T2W. Od 12. do 20. tedna se sporadični visoki signali, ki obdajajo nizke signale v zaporedju T2W, zmanjšujejo.
V skupini NPE je na mestu implantacije telesa vretenca opaziti očitno kostno hiperplazijo, ki se od 12 do 20 tednov pojavi hitreje (slika 2C) v primerjavi s skupino NPE, v modeliranih telesih vretenc pa ni opaziti pomembnih sprememb; skupina Sham in skupina ME (slika 2C) 2A,B).
(A) Površina telesa vretenca na mestu vsaditve je zelo gladka, luknja se dobro zaceli in v telesu vretenca ni hiperplazije. (B) Oblika mesta vsaditve v skupini ME je podobna obliki v skupini s placebom in sčasoma ni opaziti očitnih sprememb v videzu mesta vsaditve. (C) V skupini NPE se je na mestu vsaditve pojavila kostna hiperplazija. Kostna hiperplazija se je hitro povečala in se celo razširila skozi medvretenčno ploščico na kontralateralno telo vretenca.
Histološka analiza zagotavlja podrobnejše informacije o tvorbi kosti. Slika 3 prikazuje fotografije pooperativnih rezov, obarvanih s H&E. V skupini s placebom izvedeno operacijo so bili hondrociti dobro razporejeni in ni bila zaznana celična proliferacija (slika 3A). Stanje v skupini ME je bilo podobno kot v skupini s placebom izvedeno operacijo (slika 3B). Vendar pa so v skupini NPE na mestu implantacije opazili veliko število hondrocitov in proliferacijo celic, podobnih NP (slika 3C);
(A) Trabekule so vidne blizu končne plošče, hondrociti so lepo razporejeni z enotno velikostjo in obliko celic ter brez proliferacije (40-krat). (B) Stanje mesta implantacije v skupini ME je podobno kot v skupini sham. Trabekule in hondrociti so vidni, vendar na mestu implantacije ni očitne proliferacije (40-krat). (B) Vidimo lahko, da se hondrociti in celice, podobne NP, znatno proliferirajo, oblika in velikost hondrocitov pa sta neenakomerni (40-krat).
V skupinah NPE in ME so opazili izražanje mRNA interlevkina 4 (IL-4), mRNA interlevkina 17 (IL-17) in mRNA interferona γ (IFN-γ). Pri primerjavi ravni izražanja ciljnih genov se je izražanje genov IL-4, IL-17 in IFN-γ v skupini NPE znatno povečalo v primerjavi s skupino ME in skupino s placebom (slika 4) (P < 0,05). V primerjavi s skupino s placebom so se ravni izražanja IL-4, IL-17 in IFN-γ v skupini ME le nekoliko povečale in niso dosegle statistične spremembe (P > 0,05).
Ekspresija mRNA IL-4, IL-17 in IFN-γ v skupini NPE je pokazala bistveno višji trend kot v skupini s placebom in skupini ME (P < 0,05).
V nasprotju s tem ravni izražanja v skupini ME niso pokazale pomembne razlike (P>0,05).
Za potrditev spremenjenega vzorca izražanja mRNA je bila izvedena Western blot analiza z uporabo komercialno dostopnih protiteles proti IL-4 in IL-17. Kot je prikazano na slikah 5A in B, so bile v primerjavi s skupino ME in skupino s placebom izvedeno operacijo ravni beljakovin IL-4 in IL-17 v skupini NPE znatno povečane (P < 0,05). V primerjavi s skupino s placebom izvedeno operacijo ravni beljakovin IL-4 in IL-17 v skupini ME prav tako niso dosegle statistično značilnih sprememb (P > 0,05).
(A) Ravni beljakovin IL-4 in IL-17 v skupini NPE so bile bistveno višje kot v skupini ME in skupini s placebom (P < 0,05). (B) Histogram Western blota.
Zaradi omejenega števila človeških vzorcev, pridobljenih med operacijo, so jasne in podrobne študije o patogenezi karcinoma mieloidomide (MC) nekoliko težavne. Poskušali smo vzpostaviti živalski model MC, da bi preučili njegove potencialne patološke mehanizme. Hkrati smo uporabili radiološko, histološko in molekularno biološko oceno za spremljanje poteka MC, ki jo je povzročil avtograftni presadek NP. Posledično je model implantacije NP povzročil postopno spremembo intenzivnosti signala od 12. do 20. tedna (mešani nizek signal v zaporedjih T1W in nizek signal v zaporedjih T2W), kar kaže na spremembe tkiva, histološka in molekularno biološka ocena pa sta potrdili rezultate radiološke študije.
Rezultati tega poskusa kažejo, da so se na mestu kršitve telesa vretenc v skupini NPE pojavile vizualne in histološke spremembe. Hkrati so opazili izražanje genov IL-4, IL-17 in IFN-γ ter IL-4, IL-17 in IFN-γ, kar kaže na to, da lahko kršitev avtolognega tkiva nucleus pulposus v telesu vretenc povzroči vrsto signalnih in morfoloških sprememb. Zlahka je ugotoviti, da so signalne značilnosti teles vretenc živalskega modela (nizek signal v zaporedju T1W, mešani signal in nizek signal v zaporedju T2W) zelo podobne tistim pri človeških vretenčnih celicah, značilnosti MRI pa potrjujejo tudi opažanja histologije in bruto anatomije, torej da so spremembe v celicah teles vretenc progresivne. Čeprav se vnetni odziv, ki ga povzroči akutna travma, lahko pojavi kmalu po punkciji, so rezultati MRI pokazali, da so se progresivno naraščajoče spremembe signala pojavile 12 tednov po punkciji in trajale do 20 tednov brez kakršnih koli znakov okrevanja ali odprave sprememb MRI. Ti rezultati kažejo, da je avtologna vretenčna NP zanesljiva metoda za vzpostavitev progresivne mikrovalne ventilacije pri kuncih.
Ta model punkcije zahteva ustrezno spretnost, čas in kirurški napor. V predhodnih poskusih lahko disekcija ali prekomerna stimulacija paravertebralnih ligamentnih struktur povzroči nastanek vretenčnih osteofitov. Paziti je treba, da ne poškodujete ali dražite sosednjih medvretenčnih ploščic. Ker je treba za doseganje doslednih in ponovljivih rezultatov nadzorovati globino penetracije, smo ročno izdelali čep z odrezom ovojnice 3 mm dolge igle. Uporaba tega čepa zagotavlja enakomerno globino vrtanja v telesu vretenca. V predhodnih poskusih so trije ortopedski kirurgi, ki so sodelovali pri operaciji, ugotovili, da je z iglami kalibra 16 lažje delati kot z iglami kalibra 18 ali drugimi metodami. Da bi se izognili prekomerni krvavitvi med vrtanjem, bo iglo nekaj časa držite pri miru in tako zagotovili primernejšo vstavitveno luknjo, kar kaže na to, da je na ta način mogoče nadzorovati določeno stopnjo mehanske gostote.
Čeprav so se številne študije osredotočile na MC, je o etiologiji in patogenezi MC25,26,27 znanega malo. Na podlagi naših prejšnjih študij smo ugotovili, da ima avtoimunost ključno vlogo pri nastanku in razvoju MC12. Ta študija je preučevala kvantitativno izražanje IL-4, IL-17 in IFN-γ, ki so glavne poti diferenciacije celic CD4+ po stimulaciji z antigenom. V naši študiji je imela skupina NPE v primerjavi z negativno skupino višjo ekspresijo IL-4, IL-17 in IFN-γ, višje pa so bile tudi ravni beljakovin IL-4 in IL-17.
Klinično je izražanje mRNA IL-17 povečano v celicah NP pri bolnikih s hernijo diska28. Povečane ravni izražanja IL-4 in IFN-γ so bile ugotovljene tudi v modelu akutne nekompresijske hernije diska v primerjavi z zdravimi kontrolnimi osebami29. IL-17 ima ključno vlogo pri vnetju in poškodbah tkiva pri avtoimunskih boleznih30 ter krepi imunski odziv na IFN-γ31. O okrepljeni poškodbi tkiva, ki jo povzroča IL-17, so poročali pri miših MRL/lpr32 in miših, dovzetnih za avtoimunost33. IL-4 lahko zavira izražanje provnetnih citokinov (kot sta IL-1β in TNFα) in aktivacijo makrofagov34. Poročali so, da se je izražanje mRNA IL-4 v skupini NPE razlikovalo v primerjavi z IL-17 in IFN-γ v istem časovnem obdobju; izražanje mRNA IFN-γ v skupini NPE je bilo bistveno višje kot v drugih skupinah. Zato je lahko proizvodnja IFN-γ mediator vnetnega odziva, ki ga povzroči interkalacija NP. Študije so pokazale, da IFN-γ proizvajajo različne vrste celic, vključno z aktiviranimi celicami T pomočniki tipa 1, naravnimi celicami ubijalkami in makrofagi35,36, in je ključni provnetni citokin, ki spodbuja imunski odziv37.
Ta študija kaže, da je avtoimunski odziv lahko vpleten v pojav in razvoj MC. Luoma in sod. so ugotovili, da so signalne značilnosti MC in prominentne NP na MRI podobne in da oba kažeta visok signal v zaporedju T2W38. Za nekatere citokine je bilo potrjeno, da so tesno povezani s pojavom MC, kot je IL-139. Ma in sod. so predlagali, da ima lahko navzgor ali navzdol usmerjena protruzija NP velik vpliv na pojav in razvoj MC12. Bobechko40 in Herzbein in sod.41 so poročali, da je NP imunotolerantno tkivo, ki od rojstva ne more vstopiti v žilni krvni obtok. Izbokline NP vnašajo tujke v krvni obtok in s tem posredujejo lokalne avtoimunske reakcije42. Avtoimunske reakcije lahko sprožijo veliko število imunskih dejavnikov, in ko so ti dejavniki nenehno izpostavljeni tkivom, lahko povzročijo spremembe v signalizaciji43. V tej študiji so prekomerno izražanje IL-4, IL-17 in IFN-γ tipični imunski dejavniki, kar dodatno dokazuje tesno povezavo med NP in MC44. Ta živalski model dobro posnema preboj NP in vstop v končno ploščo. Ta postopek je dodatno razkril vpliv avtoimunosti na MC.
Kot je bilo pričakovati, nam ta živalski model ponuja možno platformo za preučevanje mikrohrustanca (MC). Vendar ima ta model še vedno nekaj omejitev: prvič, med fazo opazovanja živali je treba nekatere kunce v vmesnem stadiju evtanazirati za histološko in molekularno biološko testiranje, zato nekatere živali sčasoma »izginejo iz uporabe«. Drugič, čeprav so v tej študiji določene tri časovne točke, smo žal modelirali le en tip MC (sprememba Modic tipa I), zato to ni dovolj za predstavitev procesa razvoja človeške bolezni in je treba nastaviti več časovnih točk, da bi bolje opazovali vse spremembe signala. Tretjič, spremembe v strukturi tkiva je res mogoče jasno prikazati s histološkim barvanjem, vendar lahko nekatere specializirane tehnike bolje razkrijejo mikrostrukturne spremembe v tem modelu. Na primer, za analizo nastanka fibrohrustanca v medvretenčnih ploščicah zajcev je bila uporabljena polarizirana svetlobna mikroskopija45. Dolgoročni učinki NP na MC in končno ploščo zahtevajo nadaljnje raziskave.
Štiriinpetdeset samcev novozelandskih belih kuncev (teža približno 2,5–3 kg, starost 3–3,5 meseca) je bilo naključno razdeljenih v skupino s simulirano operacijo, skupino z vsaditvijo mišic (skupina ME) in skupino z vsaditvijo živčnih korenin (skupina NPE). Vse eksperimentalne postopke je odobril Etični odbor bolnišnice Tianjin, eksperimentalne metode pa so bile izvedene v strogem skladu z odobrenimi smernicami.
Kirurška tehnika S. Sobajime 46 je bila nekoliko izboljšana. Vsak kunec je bil nameščen v bočni ležeči položaj in sprednja površina petih zaporednih ledvenih medvretenčnih ploščic (IVD) je bila izpostavljena s posterolateralnim retroperitonealnim pristopom. Vsak kunec je prejel splošno anestezijo (20 % uretan, 5 ml/kg skozi ušesno veno). Narejen je bil vzdolžni kožni rez od spodnjega roba reber do roba medenice, 2 cm ventralno od paravertebralnih mišic. Desna anterolateralna hrbtenica od L1 do L6 je bila izpostavljena z ostro in topo disekcijo podkožnega tkiva, retroperitonealnega tkiva in mišic (slika 6A). Raven ploščice je bila določena z uporabo roba medenice kot anatomske oznake za raven ploščice L5-L6. Z iglo za vbod kalibra 16 izvrtajte luknjo v bližini končne plošče vretenca L5 do globine 3 mm (slika 6B). Z brizgo s prostornino 5 ml odvzemite avtologni pulpni nukleus v medvretenčni ploščici L1-L2 (slika 6C). Odstranite pulpni nukleus ali mišico v skladu z zahtevami vsake skupine. Po poglobitvi izvrtane luknje se na globoko fascijo, površinsko fascijo in kožo namestijo vpojni šivi, pri čemer pazite, da med operacijo ne poškodujete periostealnega tkiva telesa vretenca.
(A) Disk L5–L6 se izpostavi s posterolateralnim retroperitonealnim pristopom. (B) Z iglo kalibra 16 izvrtajte luknjo v bližini končne plošče L5. (C) Odvzamejo se avtologni MF.
Splošna anestezija je bila izvedena z 20 % uretanom (5 ml/kg), ki je bil apliciran skozi ušesno veno, rentgensko slikanje ledvene hrbtenice pa je bilo ponovljeno 12, 16 in 20 tednov po operaciji.
Kunce so žrtvovali z intramuskularno injekcijo ketamina (25,0 mg/kg) in intravensko injiciranim natrijevim pentobarbitalom (1,2 g/kg) 12, 16 in 20 tednov po operaciji. Za histološko analizo je bila odstranjena celotna hrbtenica in izvedena je bila dejanska analiza. Za odkrivanje sprememb imunskih faktorjev sta bila uporabljena kvantitativna reverzna transkripcija (RT-qPCR) in Western blot.
Preiskave z magnetno resonanco (MRI) so bile opravljene pri kuncih z uporabo kliničnega magneta z močjo 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC), opremljenega z ortogonalnim sprejemnikom tuljave za okončine. Kunce so anestezirali z 20 % uretanom (5 ml/kg) preko ušesne vene in nato namestili na hrbet v magnet, tako da je bil ledveni predel osredotočen na krožni površinski tuljavi s premerom 5 palcev (GE Medical Systems). Za določitev lokacije ledvenega diska od L3–L4 do L5–L6 so bile pridobljene koronalne T2-utežene slike lokalizatorja (TR, 1445 ms; TE, 37 ms). Sagitalno-ravninske T2-utežene rezine so bile pridobljene z naslednjimi nastavitvami: hitro zaporedje vrtenja in odmeva s časom ponovitve (TR) 2200 ms in časom odmeva (TE) 70 ms, matrika; vidno polje 260 in osem dražljajev; debelina reza je bila 2 mm, razmik pa 0,2 mm.
Po zadnji fotografiji in usmrtitvi zadnjega zajca so bili lažni, mišično vdelani in NP diski odstranjeni za histološki pregled. Tkiva so bila 1 teden fiksirana v 10 % nevtralnem puferiranem formalinu, dekalcificirana z etilendiamintetraocetno kislino in parafinsko narezana. Bloki tkiva so bili vdelani v parafin in z mikrotomom narezani na sagitalne reze (debeline 5 μm). Rezine so bile obarvane s hematoksilinom in eozinom (H&E).
Po odvzemu medvretenčnih ploščic kuncev v vsaki skupini je bila celotna RNA ekstrahirana z uporabo kolone UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kitajska) v skladu z navodili proizvajalca in sistemom reverzne transkripcije ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, ZDA). Izvedena je bila reverzna transkripcija.
RT-qPCR smo izvedli z uporabo Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., ZDA) in SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. Reakcijski volumen PCR je bil 20 μl in je vseboval 1,5 μl razredčene cDNA in 0,2 μM vsakega primerja. Primerje je zasnovalo podjetje OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, Kalifornija) in jih je izdelalo podjetje Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kitajska) (tabela 1). Uporabljeni so bili naslednji pogoji termičnega cikliranja: začetni korak aktivacije polimeraze pri 94 °C 2 minuti, nato 40 ciklov po 15 sekund pri 94 °C za denaturacijo predloge, žarjenje 1 minuto pri 60 °C, podaljšanje in fluorescenca. Meritve so bile izvedene 1 minuto pri 72 °C. Vsi vzorci so bili trikrat pomnoženi, povprečna vrednost pa je bila uporabljena za analizo RT-qPCR. Podatki amplifikacije so bili analizirani z uporabo programa FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, Kalifornija, ZDA). Izražanje genov IL-4, IL-17 in IFN-γ je bilo normalizirano glede na endogeni nadzor (ACTB). Relativne ravni izražanja ciljne mRNA so bile izračunane z metodo 2-ΔΔCT.
Celotni proteini so bili ekstrahirani iz tkiv z uporabo homogenizatorja tkiva v liznem pufru RIPA (ki je vseboval koktajl zaviralcev proteaze in fosfataze) in nato centrifugirani pri 13.000 vrt/min 20 minut pri 4 °C, da so odstranili tkivne delce. Petdeset mikrogramov proteinov je bilo naloženih na stezo, ločenih z 10 % SDS-PAGE in nato prenesenih na PVDF membrano. Blokiranje je bilo izvedeno v 5 % posnetem mleku v prahu v Tris-puferirani fiziološki raztopini (TBS), ki je vsebovala 0,1 % Tween 20, 1 uro pri sobni temperaturi. Membrana je bila inkubirana s primarnim protitelesom kunčjega anti-decorina (razredčeno 1:200; Boster, Wuhan, Kitajska) (razredčeno 1:200; Bioss, Peking, Kitajska) čez noč pri 4 °C in reagirana drugi dan; s sekundarnim protitelesom (kozji anti-kunčji imunoglobulin G v razredčitvi 1:40.000) v kombinaciji s hrenovo peroksidazo (Boster, Wuhan, Kitajska) 1 uro pri sobni temperaturi. Signali Western blota so bili zaznani s povečano kemiluminiscenco na kemiluminiscenčni membrani po obsevanju z rentgenskimi žarki. Za denzitometrično analizo so bili bloti skenirani in kvantificirani s programsko opremo BandScan, rezultati pa so bili izraženi kot razmerje med imunoreaktivnostjo ciljnega gena in imunoreaktivnostjo tubulina.
Statistični izračuni so bili opravljeni z uporabo programskega paketa SPSS16.0 (SPSS, ZDA). Podatki, zbrani med študijo, so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon (povprečje ± SD) in analizirani z enosmerno analizo variance s ponavljajočimi se meritvami (ANOVA) za določitev razlik med obema skupinama. Vrednost P < 0,05 je bila ocenjena kot statistično pomembna.
Tako lahko vzpostavitev živalskega modela MC z vsaditvijo avtolognih NP v telo vretenca in izvajanjem makroanatomskega opazovanja, MRI analize, histološke ocene in molekularno biološke analize postane pomembno orodje za ocenjevanje in razumevanje mehanizmov človeškega MC ter razvoj novih terapevtskih posegov.
Kako citirati ta članek: Han, C. et al. Živalski model Modicovih sprememb je bil vzpostavljen z vsaditvijo avtolognega pulpoznega jedra (nucleus pulposus) v subhondralno kost ledvene hrbtenice. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. in Boos, N. Slikanje z magnetno resonanco ledvene hrbtenice: prevalenca hernije in retencije diska, kompresija živčnih korenin, nepravilnosti končne plošče in osteoartritis fasetnega sklepa pri asimptomatskih prostovoljcih. stopnja. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS in Leboeuf-Eed, K. Spremembe Modica in njihova povezava s kliničnimi ugotovitvami. European Spine Journal: uradna publikacija Evropskega združenja za hrbtenico, Evropskega združenja za deformacije hrbtenice in Evropskega združenja za raziskave vratne hrbtenice 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M. in sod. Modične spremembe v končnih ploščah ledvenih vretenc: prevalenca in povezava z bolečinami v križu in išiasom pri moških delavcih srednjih let. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. in Dalinka, M. MRI sprememb kostnega mozga blizu končne plošče pri degenerativni bolezni ledvene hrbtenice. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ in Carter, JR Degenerativna bolezen medvretenčnih ploščic: ocena sprememb vretenčnega mozga z MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS in Carter, JR Slikanje degenerativne bolezni medvretenčnih ploščic. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS in sod. Prediktorji sprememb neovertebralne končne plošče (Modic) signalizirajo v splošni populaciji. European Spine Journal: Uradna publikacija Evropskega združenja za hrbtenico, Evropskega združenja za deformacije hrbtenice in Evropskega združenja za raziskave vratne hrbtenice, oddelek 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB in Mannisch, K. Spremembe Modica po herniji ledvenega diska. European Spine Journal: Uradna publikacija Evropskega združenja za hrbtenico, Evropskega združenja za deformacije hrbtenice in Evropskega združenja za raziskave vratne hrbtenice 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. in Kaapa, E. Spremembe tipa I, ki jih povzroča Modic, lahko napovedujejo hitro progresivno deformacijsko degeneracijo medvretenčne ploščice: enoletna prospektivna študija. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ in Fan, SW Spremembe modičnih mišic: možni vzroki in prispevek k degeneraciji ledvenih ploščic. Medical Hypotheses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Notranja ruptura medvretenčne ploščice. Težave s prolapsom ploščice v 50 letih. Hrbtenica (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Čas objave: 13. dec. 2024