Hvala, ker ste obiskali Nature.com. Različica brskalnika, ki jo uporabljate, ima omejeno podporo za CSS. Za najboljše rezultate priporočamo uporabo novejšega brskalnika (ali onemogočanje načina združljivosti v Internet Explorerju). Da bi zagotovili nadaljnjo podporo, bomo medtem stran prikazali brez slogov in JavaScripta.
Vzpostavitev živalskih modelov modičnih sprememb (MC) je pomembna osnova za preučevanje MC. Štiriinpetdeset novozelandskih belih zajcev je bilo razdeljenih v skupino za navidezno operacijo, skupino za implantacijo mišic (skupina ME) in skupino za implantacijo nucleus pulposus (skupina NPE). V skupini NPE je bil medvretenčni disk izpostavljen z anterolateralnim ledvenim kirurškim pristopom in z iglo je bila prebadana telo vretenca L5 blizu končne plošče. NP smo ekstrahirali iz medvretenčne ploščice L1/2 z brizgo in vanj vbrizgali. Vrtanje luknje v subhondralno kost. Kirurški postopki in metode vrtanja v skupini z mišično implantacijo in skupini z lažno operacijo so bili enaki tistim v skupini z implantacijo NP. V skupini ME je bil v luknjo vstavljen košček mišice, medtem ko v skupini z lažno operacijo v luknjo niso vstavili ničesar. Po operaciji so opravili MRI in molekularno biološko testiranje. Signal v skupini NPE se je spremenil, vendar ni bilo očitne spremembe signala v skupini z lažno operacijo in skupini ME. Histološko opazovanje je pokazalo, da so opazili nenormalno proliferacijo tkiva na mestu implantacije, izražanje IL-4, IL-17 in IFN-γ pa je bilo povečano v skupini NPE. Implantacija NP v subhondralno kost lahko tvori živalski model MC.
Modične spremembe (MC) so lezije končnih plošč vretenc in sosednjega kostnega mozga, vidne na slikanju z magnetno resonanco (MRI). Pogoste so pri posameznikih s povezanimi simptomi1. Številne študije so poudarile pomen MC zaradi njegove povezave z bolečino v križu (LBP)2,3. de Roos et al.4 in Modic et al.5 sta neodvisno najprej opisala tri različne vrste subhondralnih signalnih nepravilnosti v vretenčnem kostnem mozgu. Modične spremembe tipa I so hipointenzivne na T1-uteženih (T1W) sekvencah in hiperintenzivne na T2-uteženih (T2W) sekvencah. Ta lezija razkrije končne plošče fisure in sosednje vaskularno granulacijsko tkivo v kostnem mozgu. Spremembe Modic tipa II kažejo visok signal na sekvencah T1W in T2W. Pri tej vrsti lezije je mogoče najti destrukcijo končne plošče in histološko maščobno zamenjavo sosednjega kostnega mozga. Modične spremembe tipa III kažejo nizek signal v sekvencah T1W in T2W. Opazili so sklerotične lezije, ki ustrezajo končnim ploščam6. MC velja za patološko bolezen hrbtenice in je tesno povezana s številnimi degenerativnimi boleznimi hrbtenice7,8,9.
Glede na razpoložljive podatke je več študij zagotovilo podroben vpogled v etiologijo in patološke mehanizme MC. Albert et al. predlagal, da bi MC lahko povzročila hernija diska8. Hu et al. pripisal MC hudi degeneraciji diska10. Kroc je predlagal koncept "notranje rupture diska", ki navaja, da lahko ponavljajoče se poškodbe diska povzročijo mikroraztrganine na končni plošči. Po nastanku razpoke lahko uničenje končne plošče s nucleus pulposus (NP) sproži avtoimunski odziv, ki nadalje vodi v razvoj MC11. Ma et al. delili podobno mnenje in poročali, da ima NP-inducirana avtoimunost ključno vlogo pri patogenezi MC12.
Celice imunskega sistema, zlasti limfociti T-pomočniki CD4+, igrajo ključno vlogo pri patogenezi avtoimunosti13. Nedavno odkrita podskupina Th17 proizvaja vnetni citokin IL-17, spodbuja ekspresijo kemokinov in stimulira celice T v poškodovanih organih, da proizvajajo IFN-γ14. Celice Th2 imajo tudi edinstveno vlogo v patogenezi imunskih odzivov. Izražanje IL-4 kot reprezentativne celice Th2 lahko povzroči resne imunopatološke posledice15.
Čeprav je bilo na MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 izvedenih veliko kliničnih študij, še vedno primanjkuje primernih poskusnih modelov na živalih, ki bi lahko posnemali proces MC, ki se pogosto pojavlja pri ljudeh in ga je mogoče uporabljajo za raziskovanje etiologije ali novih zdravljenj, kot je tarčna terapija. Do danes so poročali le o nekaj živalskih modelih MC, ki preučujejo osnovne patološke mehanizme.
Na podlagi avtoimunske teorije, ki sta jo predlagala Albert in Ma, je ta študija vzpostavila preprost in ponovljiv zajčji model MC z avtotransplantacijo NP v bližini izvrtane vretenčne končne plošče. Drugi cilji so opazovanje histoloških značilnosti živalskih modelov in ovrednotenje specifičnih mehanizmov NP pri razvoju MC. V ta namen uporabljamo tehnike, kot so molekularna biologija, MRI in histološke študije za preučevanje napredovanja MC.
Dva zajca sta poginila zaradi krvavitve med operacijo, štirje zajci pa med anestezijo med MRI. Preostalih 48 zajcev je preživelo in po operaciji ni kazalo vedenjskih ali nevroloških znakov.
MRI kaže, da je intenziteta signala vdelanega tkiva v različnih luknjah različna. Intenzivnost signala telesa vretenca L5 v skupini NPE se je postopoma spreminjala 12, 16 in 20 tednov po vstavitvi (zaporedje T1W je pokazalo nizek signal, zaporedje T2W pa mešani signal in nizek signal) (slika 1C), medtem ko so videzi MRI drugih dveh skupin vgrajenih delov je v istem obdobju ostal relativno stabilen (sl. 1A, B).
(A) Reprezentativne zaporedne MRI zajčje ledvene hrbtenice na 3 časovnih točkah. Na slikah skupine za navidezno operacijo niso odkrili nenormalnosti signala. (B) Značilnosti signala telesa vretenca v skupini ME so podobne tistim v skupini z lažno operacijo in na mestu vdelave skozi čas ni opaziti pomembne spremembe signala. (C) V skupini NPE je nizek signal jasno viden v zaporedju T1W, mešani signal in nizek signal pa sta jasno vidna v zaporedju T2W. Od 12-tedenskega obdobja do 20-tedenskega obdobja se sporadični visoki signali, ki obdajajo nizke signale v zaporedju T2W, zmanjšajo.
Očitno hiperplazijo kosti je mogoče opaziti na mestu implantacije telesa vretenca v skupini NPE, kostna hiperplazija pa se pojavi hitreje od 12 do 20 tednov (slika 2C) v primerjavi s skupino NPE, v modelirani vretenčni skupini ni opaziti pomembne spremembe. telesa; Lažna skupina in skupina ME (sl. 2C) 2A, B).
(A) Površina telesa vretenca na implantiranem delu je zelo gladka, luknja se dobro celi in v telesu vretenca ni hiperplazije. (B) Oblika implantiranega mesta v skupini ME je podobna tisti v skupini z navideznimi operacijami in ni očitnih sprememb v videzu implantiranega mesta skozi čas. (C) Hiperplazija kosti se je pojavila na implantiranem mestu v skupini NPE. Kostna hiperplazija se je hitro povečala in se celo razširila skozi medvretenčno ploščico do kontralateralnega telesa vretenca.
Histološka analiza daje podrobnejše informacije o nastanku kosti. Slika 3 prikazuje fotografije pooperativnih rezov, obarvanih s H&E. V skupini z lažno operacijo so bili hondrociti dobro urejeni in ni bila zaznana celična proliferacija (slika 3A). Stanje v skupini ME je bilo podobno kot v skupini z lažno operacijo (slika 3B). Vendar pa so v skupini NPE na mestu implantacije opazili veliko število hondrocitov in proliferacijo celic, podobnih NP (slika 3C);
(A) Trabekule je mogoče videti blizu končne plošče, hondrociti so lepo razporejeni z enotno velikostjo in obliko celic ter brez proliferacije (40-krat). (B) Stanje mesta implantacije v skupini ME je podobno kot pri lažni skupini. Vidne so trabekule in hondrociti, vendar ni očitne proliferacije na mestu implantacije (40-krat). (B) Vidimo lahko, da se hondrociti in NP-podobne celice znatno razmnožujejo, oblika in velikost hondrocitov pa sta neenakomerni (40-krat).
Ekspresijo mRNA interlevkina 4 (IL-4), mRNA interlevkina 17 (IL-17) in mRNA interferona γ (IFN-γ) so opazili v obeh skupinah NPE in ME. Ko so primerjali ravni ekspresije ciljnih genov, so se genske ekspresije IL-4, IL-17 in IFN-γ znatno povečale v skupini NPE v primerjavi s tistimi v skupini ME in skupini z lažno operacijo (slika 4). (P <0,05). V primerjavi s skupino z lažno operacijo so se ravni izražanja IL-4, IL-17 in IFN-γ v skupini ME le rahlo povečale in niso dosegle statistične spremembe (P > 0,05).
Ekspresija mRNA IL-4, IL-17 in IFN-γ v skupini NPE je pokazala znatno večji trend kot v skupini z lažno operacijo in skupini ME (P <0,05).
V nasprotju s tem ravni izražanja v skupini ME niso pokazale pomembne razlike (P>0,05).
Western blot analiza je bila izvedena z uporabo komercialno dostopnih protiteles proti IL-4 in IL-17 za potrditev spremenjenega vzorca izražanja mRNA. Kot je prikazano na slikah 5A, B, so bile ravni beljakovin IL-4 in IL-17 v skupini NPE v primerjavi s skupino ME in skupino z lažno operacijo znatno povečane (P <0,05). V primerjavi s skupino z lažno operacijo ravni beljakovin IL-4 in IL-17 v skupini ME prav tako niso dosegle statistično značilnih sprememb (P> 0,05).
(A) Raven beljakovin IL-4 in IL-17 v skupini NPE je bila bistveno višja kot v skupini ME in placebo skupini (P <0,05). (B) Western blot histogram.
Zaradi omejenega števila človeških vzorcev, pridobljenih med operacijo, so jasne in podrobne študije o patogenezi MC nekoliko težavne. Poskušali smo vzpostaviti živalski model MC, da bi preučili njegove potencialne patološke mehanizme. Hkrati so radiološko vrednotenje, histološko vrednotenje in molekularno biološko vrednotenje uporabili za spremljanje poteka MC, ki ga povzroča avtotransplantat NP. Posledično je model implantacije NP povzročil postopno spremembo intenzitete signala od 12-tedenskih do 20-tedenskih časovnih točk (mešan nizek signal v sekvencah T1W in nizek signal v sekvencah T2W), kar kaže na spremembe tkiva ter histološke in molekularne biološke ocene so potrdile rezultate radiološke študije.
Rezultati tega poskusa kažejo, da so se v skupini NPE pojavile vizualne in histološke spremembe na mestu poškodbe telesa vretenc. Hkrati so opazili ekspresijo genov IL-4, IL-17 in IFN-γ ter IL-4, IL-17 in IFN-γ, kar kaže na kršitev avtolognega tkiva nucleus pulposus v vretencu. telo lahko povzroči vrsto signalnih in morfoloških sprememb. Zlahka je ugotoviti, da so značilnosti signala teles vretenc živalskega modela (nizek signal v zaporedju T1W, mešani signal in nizek signal v zaporedju T2W) zelo podobne tistim pri človeških vretenčnih celicah, prav tako pa tudi značilnosti MRI potrjujejo opažanja histologije in grobe anatomije, kar pomeni, da so spremembe v celicah telesa vretenc progresivne. Čeprav se lahko vnetni odziv, ki ga povzroči akutna travma, pojavi kmalu po punkciji, so rezultati MRI pokazali, da so se progresivno naraščajoče spremembe signala pojavile 12 tednov po punkciji in so vztrajale do 20 tednov brez kakršnih koli znakov okrevanja ali razveljavitve sprememb MRI. Ti rezultati kažejo, da je avtologna vretenčna NP zanesljiva metoda za ugotavljanje progresivne MV pri kuncih.
Ta punkcijski model zahteva ustrezno znanje, čas in kirurški napor. V predhodnih poskusih lahko disekcija ali pretirana stimulacija paravertebralnih ligamentnih struktur povzroči nastanek vretenčnih osteofitov. Paziti je treba, da ne poškodujete ali razdražite sosednjih diskov. Ker je treba globino penetracije kontrolirati, da dobimo dosledne in ponovljive rezultate, smo ročno izdelali čep, tako da smo odrezali ovoj 3 mm dolge igle. Uporaba tega čepa zagotavlja enakomerno globino vrtanja v telo vretenca. V preliminarnih poskusih so trije ortopedski kirurgi, ki so sodelovali pri operaciji, ugotovili, da je lažje delati z iglami velikosti 16 kot z iglami velikosti 18 ali drugimi metodami. Da bi se izognili čezmernemu krvavenju med vrtanjem, držite iglo nekaj časa pri miru, da zagotovite ustreznejšo luknjo za vstavljanje, kar nakazuje, da je na ta način mogoče nadzorovati določeno stopnjo MC.
Čeprav so bile številne študije usmerjene v MC, je malo znanega o etiologiji in patogenezi MC25,26,27. Na podlagi naših prejšnjih študij smo ugotovili, da ima avtoimunost ključno vlogo pri pojavu in razvoju MC12. Ta študija je preučevala kvantitativno izražanje IL-4, IL-17 in IFN-γ, ki so glavne diferenciacijske poti celic CD4+ po stimulaciji z antigenom. V naši študiji je imela skupina NPE v primerjavi z negativno skupino večjo ekspresijo IL-4, IL-17 in IFN-γ, višje pa so bile tudi ravni beljakovin IL-4 in IL-17.
Klinično je ekspresija mRNA IL-17 povečana v celicah NP pri bolnikih s hernijo diska28. Povečane ravni ekspresije IL-4 in IFN-γ so bile ugotovljene tudi v modelu akutne nekompresijske hernije diska v primerjavi z zdravimi kontrolnimi osebami29. IL-17 ima ključno vlogo pri vnetju, poškodbi tkiva pri avtoimunskih boleznih30 in poveča imunski odziv na IFN-γ31. Poročali so o povečani poškodbi tkiva, posredovani z IL-17, pri miših MRL/lpr32 in miših, dovzetnih za avtoimunost33. IL-4 lahko zavira izražanje vnetnih citokinov (kot sta IL-1β in TNFα) in aktivacijo makrofagov34. Poročali so, da je bila ekspresija mRNA IL-4 drugačna v skupini NPE v primerjavi z IL-17 in IFN-γ ob isti časovni točki; Ekspresija mRNA IFN-γ v skupini NPE je bila znatno višja kot v drugih skupinah. Zato je lahko proizvodnja IFN-γ posrednik vnetnega odziva, ki ga povzroči interkalacija NP. Študije so pokazale, da IFN-γ proizvaja več vrst celic, vključno z aktiviranimi pomožnimi T-celicami tipa 1, naravnimi celicami ubijalkami in makrofagi35,36, in je ključni provnetni citokin, ki spodbuja imunske odzive37.
Ta študija kaže, da je lahko avtoimunski odziv vpleten v pojav in razvoj MC. Luoma et al. ugotovili, da so značilnosti signala MC in vidnega NP podobne na MRI in oba kažeta visok signal v zaporedju T2W38. Potrjeno je bilo, da so nekateri citokini tesno povezani s pojavom MC, kot je IL-139. Ma et al. predlagal, da ima lahko štrleče NP navzgor ali navzdol velik vpliv na pojav in razvoj MC12. Bobechko40 in Herzbein et al.41 so poročali, da je NP imunotolerantno tkivo, ki ne more vstopiti v žilni obtok od rojstva. Izbokline NP uvajajo tujke v dotok krvi in tako posredujejo lokalne avtoimunske reakcije42. Avtoimunske reakcije lahko povzročijo veliko število imunskih dejavnikov in ko so ti dejavniki nenehno izpostavljeni tkivom, lahko povzročijo spremembe v signalizaciji43. V tej študiji je čezmerna ekspresija IL-4, IL-17 in IFN-γ tipični imunski dejavnik, ki dodatno dokazuje tesno povezavo med NP in MCs44. Ta živalski model dobro posnema preboj NP in vstop v končno ploščo. Ta proces je nadalje razkril vpliv avtoimunosti na MC.
Kot je bilo pričakovano, nam ta živalski model ponuja možno platformo za preučevanje MC. Vendar ima ta model še vedno nekaj omejitev: prvič, med fazo opazovanja živali je treba nekatere zajce v vmesnem stadiju evtanazirati za histološko in molekularno biološko testiranje, tako da nekatere živali sčasoma "izpadejo iz uporabe". Drugič, čeprav so v tej študiji določene tri časovne točke, smo na žalost modelirali le eno vrsto MC (sprememba Modic tipa I), tako da ni dovolj za predstavitev procesa razvoja bolezni pri ljudeh, zato je treba nastaviti več časovnih točk za bolje opazujte vse spremembe signala. Tretjič, spremembe v strukturi tkiva je res mogoče jasno prikazati s histološkim barvanjem, vendar lahko nekatere specializirane tehnike bolje razkrijejo mikrostrukturne spremembe v tem modelu. Na primer, mikroskopija s polarizirano svetlobo je bila uporabljena za analizo tvorbe vlaknastega hrustanca v medvretenčnih ploščicah zajca45. Dolgoročni učinki NP na MC in končno ploščo zahtevajo nadaljnje študije.
Štiriinpetdeset samcev novozelandskih belih zajcev (teža približno 2,5-3 kg, starost 3-3,5 mesecev) je bilo naključno razdeljenih v skupino za navidezno operacijo, skupino za mišično implantacijo (skupina ME) in skupino za implantacijo živčnih korenin (skupina NPE). Vse eksperimentalne postopke je odobril odbor za etiko bolnišnice Tianjin, eksperimentalne metode pa so bile izvedene v strogem skladu z odobrenimi smernicami.
Nekaj izboljšav je bilo narejenih v kirurški tehniki S. Sobajima 46 . Vsak zajec je bil postavljen v stranski ležeči položaj in sprednja površina petih zaporednih ledvenih medvretenčnih ploščic (IVD) je bila izpostavljena z uporabo posterolateralnega retroperitonealnega pristopa. Vsakemu kuncu smo dali splošno anestezijo (20% uretan, 5 ml/kg preko ušesne vene). Narejen je bil vzdolžni kožni rez od spodnjega roba reber do roba medenice, 2 cm ventralno do paravertebralnih mišic. Desna anterolateralna hrbtenica od L1 do L6 je bila izpostavljena z ostro in topo disekcijo prekrivnega podkožnega tkiva, retroperitonealnega tkiva in mišic (slika 6A). Raven diska je bila določena z uporabo roba medenice kot anatomskega mejnika za nivo diska L5-L6. S punkcijsko iglo 16-gauge izvrtajte luknjo blizu končne plošče vretenca L5 do globine 3 mm (slika 6B). S 5-ml brizgo aspirirajte avtologni nucleus pulposus v medvretenčni ploščici L1-L2 (slika 6C). Odstranite nucleus pulposus ali mišico v skladu z zahtevami vsake skupine. Po poglobitvi vrtanja na globoko fascijo, površinsko fascijo in kožo namestimo vpojne šive, pri čemer pazimo, da med operacijo ne poškodujemo periostealnega tkiva telesa vretenca.
(A) Disk L5–L6 je izpostavljen s posterolateralnim retroperitonealnim pristopom. (B) Z iglo kalibra 16 izvrtajte luknjo blizu končne plošče L5. (C) Avtologne MF so pobrane.
Splošno anestezijo smo dajali z 20% uretanom (5 ml/kg), apliciranim preko ušesne vene, rentgenske posnetke ledvene hrbtenice pa smo ponovili po 12, 16 in 20 tednih po operaciji.
Zajce so žrtvovali z intramuskularno injekcijo ketamina (25,0 mg/kg) in intravenskim natrijevim pentobarbitalom (1,2 g/kg) 12, 16 in 20 tednov po operaciji. Za histološko analizo so odstranili celotno hrbtenico in opravili pravo analizo. Za odkrivanje sprememb v imunskih dejavnikih sta bila uporabljena kvantitativna reverzna transkripcija (RT-qPCR) in Western blotting.
MRI preiskave so bile izvedene pri kuncih z uporabo kliničnega magneta 3,0 T (GE Medical Systems, Firence, SC), opremljenega s sprejemnikom za ortogonalno tuljavo okončin. Zajce smo anestezirali z 20 % uretanom (5 ml/kg) preko ušesne vene in jih nato položili na hrbtu znotraj magneta z ledvenim predelom, osredotočenim na okroglo površinsko tuljavo s premerom 5 palcev (GE Medical Systems). Koronske T2-utežene slike lokalizatorja (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) so bile pridobljene za določitev lokacije ledvenega diska od L3–L4 do L5–L6. T2-utežene rezine v sagitalni ravnini so bile pridobljene z naslednjimi nastavitvami: hitro zaporedje vrtenja in odmeva s časom ponavljanja (TR) 2200 ms in časom odmeva (TE) 70 ms, matrika; vidno polje 260 in osem dražljajev; Debelina reza je bila 2 mm, razmak 0,2 mm.
Ko je bila posneta zadnja fotografija in je bil zadnji zajec ubit, so bili navidezni diski, vgrajeni v mišice in diski NP odstranjeni za histološko preiskavo. Tkiva so bila 1 teden fiksirana v 10 % nevtralnem pufriranem formalinu, dekalcificirana z etilendiamintetraocetno kislino in parafinsko razrezana. Tkivni bloki so bili vstavljeni v parafin in z mikrotomom razrezani na sagitalne odseke (debeline 5 μm). Odseki so bili obarvani s hematoksilinom in eozinom (H&E).
Po zbiranju medvretenčnih ploščic kuncev v vsaki skupini smo ekstrahirali celotno RNK z uporabo kolone UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kitajska) v skladu z navodili proizvajalca in sistemom reverzne transkripcije ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, ZDA). Izvedena je bila obratna transkripcija.
RT-qPCR je bil izveden z uporabo Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., ZDA) in SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. Reakcijski volumen PCR je bil 20 μl in je vseboval 1,5 μl razredčene cDNA in 0,2 μM vsakega primerja. Primerje je zasnoval OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) in izdelal Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kitajska) (tabela 1). Uporabljeni so bili naslednji pogoji toplotnega cikla: začetni korak aktivacije polimeraze pri 94 °C za 2 minuti, nato 40 ciklov po 15 s pri 94 °C za denaturacijo predloge, žarjenje za 1 minuto pri 60 °C, podaljšanje in fluorescenca. meritve smo izvajali 1 minuto pri 72°C. Vse vzorce smo trikrat pomnožili in povprečno vrednost uporabili za analizo RT-qPCR. Podatki o ojačanju so bili analizirani z uporabo FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, ZDA). Ekspresija genov IL-4, IL-17 in IFN-γ je bila normalizirana na endogeno kontrolo (ACTB). Relativne ravni izražanja ciljne mRNA so bile izračunane z uporabo metode 2-ΔΔCT.
Skupne beljakovine smo ekstrahirali iz tkiv z uporabo tkivnega homogenizatorja v pufru za lizo RIPA (ki vsebuje koktajl zaviralcev proteaze in fosfataze) in nato centrifugirali pri 13.000 obratih na minuto 20 minut pri 4 °C, da smo odstranili ostanke tkiva. Petdeset mikrogramov beljakovin smo naložili na pas, ločili z 10% SDS-PAGE in nato prenesli na PVDF membrano. Blokiranje je bilo izvedeno v 5% nemastnem suhem mleku v tris-pufrani slanici (TBS), ki je vsebovala 0,1% Tween 20, 1 uro pri sobni temperaturi. Membrana je bila inkubirana s kunčjim anti-dekorin primarnim protitelesom (razredčeno 1:200; Boster, Wuhan, Kitajska) (razredčeno 1:200; Bioss, Peking, Kitajska) čez noč pri 4 °C in je reagirala druge dni; s sekundarnim protitelesom (kozji anti-kunčji imunoglobulin G v razredčitvi 1:40.000) v kombinaciji s hrenovo peroksidazo (Boster, Wuhan, Kitajska) 1 uro pri sobni temperaturi. Western blot signale smo zaznali s povečano kemiluminiscenco na kemiluminiscenčni membrani po rentgenskem obsevanju. Za denzitometrično analizo so bili madeži skenirani in kvantificirani z uporabo programske opreme BandScan, rezultati pa so bili izraženi kot razmerje med imunoreaktivnostjo ciljnega gena in imunoreaktivnostjo tubulina.
Statistični izračuni so bili izvedeni s programskim paketom SPSS16.0 (SPSS, ZDA). Podatki, zbrani med študijo, so bili izraženi kot povprečje ± standardna deviacija (povprečje ± SD) in analizirani z uporabo enosmerne analize variance ponovljenih meritev (ANOVA) za določitev razlik med obema skupinama. P <0,05 je veljal za statistično značilen.
Tako lahko vzpostavitev živalskega modela MC z vsaditvijo avtolognih NP v telo vretenca in izvajanjem makroanatomskega opazovanja, analize MRI, histološke ocene in molekularno biološke analize postane pomembno orodje za ocenjevanje in razumevanje mehanizmov človeškega MC in razvoj novih terapevtskih intervencije.
Kako citirati ta članek: Han, C. et al. Živalski model Modicovih sprememb je bil vzpostavljen z implantacijo avtolognega nucleus pulposus v subhondralno kost ledvene hrbtenice. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. in Boos, N. Slikanje z magnetno resonanco ledvene hrbtenice: razširjenost hernije in zadrževanja diska, kompresija živčnih korenin, nenormalnosti končne plošče in osteoartritis fasetnega sklepa pri asimptomatskih prostovoljcih . stopnja. Radiologija 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, in Leboeuf-Eed, K. Modic spremembe in njihov odnos do kliničnih ugotovitev. European Spine Journal: uradna publikacija Evropskega združenja za hrbtenico, Evropskega združenja za deformacijo hrbtenice in Evropskega združenja za raziskave vratne hrbtenice 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modične spremembe končnih plošč ledvenega vretenca: razširjenost in povezava z bolečino v križu in išiasom pri moških delavcih srednjih let. Hrbtenica 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. in Dalinka, M. MRI sprememb kostnega mozga v bližini končne plošče pri degenerativnih boleznih ledvene hrbtenice. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ in Carter, JR Degenerativna bolezen diska: ocena sprememb vretenčnega mozga z MRI. Radiologija 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS in Carter, JR Slikanje degenerativne bolezni diska. Radiologija 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktorji neovertebralne končne plošče (Modic) signalizirajo spremembe v splošni populaciji. European Spine Journal: Uradna publikacija Evropskega združenja za hrbtenico, Evropskega združenja za deformacijo hrbtenice in Evropskega združenja za raziskave vratne hrbtenice, Oddelek 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB in Mannisch, K. Modic spremembe po herniji ledvenega diska. European Spine Journal : Uradna publikacija Evropskega združenja za hrbtenico, Evropskega združenja za deformacijo hrbtenice in Evropskega združenja za raziskave vratne hrbtenice 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. in Kaapa, E. Modicove spremembe tipa I lahko napovedujejo hitro progresivno deformacijsko degeneracijo diska: enoletna prospektivna študija. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ in Fan, SW Modicove spremembe: možni vzroki in prispevek k degeneraciji ledvenega diska. Medicinske hipoteze 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Notranja ruptura diska. Težave z prolapsom diska nad 50 let. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Čas objave: 13. december 2024